Estructura y funcionamiento del riñón

Órganos pares situados a ambos lados de la columna vertebral por debajo del diafragma y el hígado. Cada riñón adulto pesa160g y mide unos 11cm de longitud y 5-7cm de anchura -aproximadamente el tamaño de un puño.

La eliminación de los productos de desecho del metabolismo es necesaria para mantener un funcionamiento normal.

Entre estos productos se encuentra la urea formado a partir del metabolismo de las proteínas, el acido úrico derivado de los ácidos nucleicos, la bilirrubina procedente de la degradación de la hemoglobina, la creatinina, formada en el metabolismo muscular y los metabolitos de algunas hormonas. También eliminan sustancias como fármacos , pesticidas y aditivos de los alimentos.

Filtración glomerular

Los capilares glomerulares poseen grandes poros en sus paredes, y la capa de la cápsula de Bowman. El agua junto con otros productos disueltos en ella (pero no las proteínas) pueden pasar de este modo desde el plasma sanguíneo al interior de la cápsula y los túbulos de la nefrona.

El volumen de este filtrado producido por ambos riñones por minuto recibe el nombre de filtración glomerular.

Las células endoteriales de los capilares glomerulares poseen grandes poros (200-500Å de diámetro) y son permeables al agua plasmática, pero suficientemente pequeños para impedir el paso al filtrado de glóbulos rojos, leucocitos y plaquetas.
Antes de que el filtrado pueda penetrar en el interior de la cápsula glomerular, ha de pasar a través de los poros de los capilares, la membrana basal (una capa fina de glicoproteínas situada por fuera de las células endoteriales)y una capa interna (visceral)de la capsula glomerural .

Filtración glomerular

El liquido que penetra la capsula glomerural se denomina ultrafiltrado debido a que se forma a presión – la presión hidrostática de las sangre.

Reabsorción de sal y agua

La mayoría de la sal y el agua filtradas de la sangre regresan a la misma a través de la pared del túbulo proximal.
La reabsorción del agua se produce por ósmosis, en la cual el agua sigue al trasporte de NaCl desde el túbulo a los capilares de alrededor.
La mayoría del agua que queda en el filtrado se reabsorbe a través de la pared de los túbulos colectores situados en la médula renal.
Esto se produce como consecuencia de la presión osmótica elevada del liquido tisular de alrededor, que se produce por procesos de trasponte en el asa de Henle.

Aclaramiento plasmático renal
Cuando la sangre pasa a través de los riñones, parte de los componentes del plasma se eliminan y se excretan por la orina. La sangre es hasta cierto punto aclarada (limpiada) de ciertos solutos en proceso de formación del a orina.
Una de las principales funciones es eliminar el exceso de iones y productos de desecho de la sangre. La limpieza o aclaramiento de la sangre se logra a través de la excreción por la orina.

Aclaramiento renal de la inulina medición de FG

Es un polímero del monosacárido fructosa.
Una vez inyectado en la sangre, la inulina se filtra por los glomérulos, y la cantidad de inulina excretada por minuto es exactamente igual a la cantidad que se filtro por minuto. Si se mide la concentración de inulina en la orina y se determina la velocidad de formación de la orina. Se puede calcular la tasa de excreción de inulina.
La velocidad con la que se filtra una sustancia en los glomérulos (miligramos por minuto) se puede calcular multiplicando los mL del plasma filtrados por minutos (FG) por la concentración de esa sustancia en el plasma

Regulación –acidobásica renal
Los riñones contribuye al regular el pH sanguíneo excretando H+ por la orina y reabsorbiendo bicarbonato. El H+ penetra el filtrado de dos maneras: por filtración a través de los glomérulos y por la secreción a los túbulos. La mayor parte de la secreción de H+ se produce a través de la pared el túbulo proximal en intercambio por la reabsorción de Na+.este intercambio lo realiza por un trasportador denominado “antiporte” debido que mueve Na+y H+ en direcciones opuestas.
Dado que los riñones normalmente reabsorben casi todo el bicarbonato filtrado y excretan H+, la orina normalmente contiene poco bicarbonato y es ligeramente ácida, pH entre 5y7.

Funciones de los riñones
Regulación del volumen y la osmolaridad de los líquidos corporales mediante el control del equilibrio electrostático y hídrico.

Excreción de productos de desecho producidos por el metabolismo celular y de las sustancias químicas extrañas al organismo.

Regulación de la presión arterial.

Regulación del equilibrio acido- base

Calor de vaporización de líquidos puros

OBJETIVO

El objetivo es esta práctica es determinar el calor de vaporización de un líquido puro, directamente conociendo la cantidad de líquido que se evapora cuando una cantidad medida de calor en su punto de ebullición.

INTRODUCCIÓN

El calor de vaporización es la cantidad de calor necesaria para cambiar una mol de líquido en vapor.
La entalpía de vaporización es la diferencia de entalpía de vapor y líquido y puede decirse que es la energía que se necesita para vencer las fuerzas intramoleculares que mantienen a las moléculas en el estado liquido y pasarlas a la fase gaseosa.
En una evaporación el ΔHV será siempre positivo y en una condensación es negativo y numéricamente igual al calor adsorbido en la vaporización.

MATERIALES Y MÉTODOS

Aparatos:
Amperímetro 0-10amp, voltímetro 0-6 volts, reóstato, refrigerante recto, matraz de destilación 1000 mL cubierto con un material aislante, tapón de hule, resistencia, 3 pesa filtros de 30 mL, pinza para tubo de ensaye, cronometro y servilletas.
Sustancia: agua destilada.

Procedimiento
En el presente experimento no se considerará el calor absorbido por el calorímetro. Lo anterior se justifica ya que se trabajara en períodos de tiempo cortos, régimen estable y en un sistema aproximadamente adiabático.
1. El matraz ya forrado se llena 2/3 partes de su capacidad con agua destilada y se monta el equipo como se muestra en la Figura 1.



Figura 1. Diagrama del equipo montado.
2. Se introduce los electrodos dentro del matraz y se pasa corriente por el circuito. Se espera a que la velocidad de producción del condensado sea constante.
3. Se peso el pesafiltro (w1).
4. Ya constante la velocidad de producción del condensado, se lee el voltaje y el amperaje y a un tiempo conocido se coloca el pesafiltro a recoger destilado por un período de tiempo determinado. Este tiempo permite conocer la cantidad de calor que se necesitó para vaporizar la cantidad de líquido colectado en el pesafiltro.
5. Pesar el pesafiltro con el líquido conectado (w2).
Repetir todo el procedimiento 3 veces como mínimo.

OBSERVACIONES Y RESULTADOS

En la Tabla 1 se registraron los datos obtenidos





DISCUSIONES

Si una sustancia presenta un punto de ebullición alto, su presión de vapor será pequeña, ya que se requiere mayor energía para pasar de líquido a gas.
Si una sustancia presenta un ΔHV alto, la sustancia será menos volátil, ya que se requiere mayor energía para evaporar un mol o gramo de sustancia. El valor bibliográfico o teórico del ΔHV es de 9710 cal/ mol-1. El promedio del calor de vaporización experimental del agua obtenido fue 10655.569 cal/ mol•k. La diferencia entre estos valores es 945.569, que se atribuyen a errores experimentales (determinación correcta del peso de los pesafiltros, lectura de I, T y V, entre otras condiciones).

CONCLUSIONES

Se determinó el calor de vaporización del agua, directamente conociendo la cantidad de líquido que se evapora cuando una cantidad medida de calor en su punto de ebullición.
En una evaporación el ΔHV será siempre positivo y en una condensación es negativo y numéricamente igual al calor adsorbido en la vaporización.
El promedio del calor de vaporización experimental del agua obtenido fue 10655.569 cal/ mol•k.

BIBLIOGRAFÍA
Fundamentos de fisicoquímica, Maron y Prutton, capitulo 6. México: Editorial Limusa, c1990

Determinación de la presión de vapor de un líquido

OBJETIVO

El objetivo de este experimento es medir la presión de vapor de un líquido puro en un rango de presiones de aproximadamente 3000 a 899 mm Hg. Se calculará también el calor de vaporización a partir de los datos de presión de vapor.

INTRODUCCIÓN

La presión de vapor es aquella presión que un vapor ejerce sobre su líquido, un gas en equilibrio se conoce como vapor. La presión de vapor de un líquido puro es la presión a la cual el líquido está en equilibrio con su vapor. Este equilibrio es dinámico esto es, el número de moléculas evaporadas es igual al número de moléculas de vapor que se condensan. Cuando se introduce un líquido puro en un recipiente evacuado, el líquido se vaporiza hasta establecer una presión de vapor arriba del líquido. Esta presión depende del líquido que se trate y es, al equilibrio, constante para cada temperatura.
La presión de vapor aumenta cuando aumenta la temperatura hasta llegar a la temperatura crítica. Arriba de esta temperatura no existe el estado líquido y por lo tanto el concepto de presión de vapor no es válido; lo anterior puede explicarse por medio de la teoría cinética ya que al incrementar la temperatura, mayor porción de moléculas adquieren suficiente energía para escapar del esta líquido y mayor es la presión de vapor. Arriba de la temperatura crítica la tendencia de las moléculas escapar es tan grande que ninguna presión es suficiente para mantenerlas en el estado líquido y la masa se conserva como vapor.
Por lo consiguiente si conocemos la presión externa y medimos la temperatura a la que líquido hierve, conocemos el valor de la presión de vapor del líquido a la temperara citada. La magnitud de esta presión puede medirse con un manómetro.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Materiales: termómetro (150°C), tapón monohorado (n°2), bomba de vacío, mangueras de hule, refrigerante recto, matraz de tres bocas de 100 Ml, placa de calentamiento, manómetro diferencial y regla.
Se recomienda desgasificar, mediante ebullición del líquido problema, antes de efectuar el experimento. Se colocan los tapones y se comprueba que no haya fugas en el sistema. Se introduce vacío dentro del matraz. Se calienta el líquido lentamente, de tal manera que el refrigerante condensador alcance a condensar todos los vapores generales y evita tasi condensación sobre el mercurio del manómetro. Al llegar al punto de ebullición del líquido se lee la temperatura y la diferencia de alturas del mercurio en el manómetro. Se repite el procedimiento anterior a diferentes presiones, mediante la admisión de aire al sistema. Obteniéndose diferentes presiones de vapor a las temperaturas correspondientes.


OBSERVACIONES Y RESULTADOS

PATM = 745 mmHg
PVACIO = Es la leída en el manómetro.
PABSOLUTA = PATMOSFERICA - PVACIO

Temperatura (K) Presión (mmHg) 1/T In P
372.65 745 2.68X10-3 6.613
370.15 698 2.70X10-3 6.548
368.95 653 2.71X10-3 6.481


DISCUSIONES

No fue posible manipular la presión externa, más adecuadamente por lo que sólo se realizaron tres mediciones con vacío (-) y no se aumento la presión (+) lo que significaría más puntos en la grafica, aunque no influyó notalmente, porque el calor de vaporización salió secano al de bibliografía.

CONCLUSIONES

El agua hirvió cuando la presión externa y la presión de vapor alcanzaron el equilibrio. Si la diferencia entre presión de vapor y la presión externa es pequeña el equilibrio entre ambas se logra más rápido y el agua hierve a menor temperatura, ya que se requiere menor temperatura para que aumente la presión de vapor y sea comparable con la presión externa. La dependencia entre la presión de vapor y la temperatura es directamente proporcional, por lo que al aumentar la temperatura y así su energía cinética, la presión de vapor también aumenta, por lo tanto si una aumenta la otra también, y si una disminuye la otra también. El calor de vaporización del agua obtenido experimentalmente fue 9640.6 cal/ mol•k y el bibliográfico es de 9710 cal/ mol-1. Se consideró un resultado aceptable.

BIBLIOGRAFÍA

Fisicoquímica fundamental / Samuel H. Maron, Jerome B. Lando.-- México: Editorial Limusa, c1990

DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN Y VIABILIDAD CELULAR

RESUMEN

Se determinó la concentración y viabilidad de una suspensión celular (linfoma de células B). El azul tripán tiñe a las células que presentan daño en la membrana plasmática, fue utilizado para diferenciar entre células viables y no viables / teñidas con azul tripán. Se preparó una disolución 1:2 con 10 μL del cultivo y azul de tripàn. Se usó la cámara de Neubauer para contar e inferir el número de células viables, como concentración celular, expresadas en células por mililitro. El volumen celular en el cual se han contado las células resulta de multiplicar la profundidad de la cámara por el factor de dilución, la superficie de los cuadrados y el número de cuadrados contados. Se encontró a partir de las células (linfoma de células B) proporcionadas un 85.92 % de viabilidad y 580 0000 cel /mL de concentración celular.

INTRODUCCIÓN

Una suspensión celular se caracteriza por presentar un número de partículas microscópicas dispersas en un fluido. Habitualmente será necesario determinar tanto la densidad de las células en la suspensión, así como el porcentaje de éstas que son viables. Para determinar la densidad de las células se emplean diferentes técnicas, una de ellas es la cámara de contaje celular de la que existe numerosas variantes, entre ellas la cámara de Neubauer hasta equipos automáticos de contaje celular como el "Cell Coulter" de la empresa Beckman-Coulter.
La cámara de Neubauer o hemacitómetro (Figura 1), es utilizada generalmente para la cuenta de células sanguíneas como son los eritrocitos (glóbulos rojos) y linfocitos (glóbulos blancos), pero también puede ser utilizada para el conteo de otros tipos celulares. Las áreas grandes indicadas con los números 1, 2, 3 y 4 en la Figura 1 son utilizadas para contar los glóbulos blancos y el área con el número 5 es para contar los glóbulos rojos y plaquetas. Está cámara de contaje se adaptada al microscopio óptico. La cámara consta de un cubre objetos de cuarzo, con una depresión en el centro, y con una cuadricula marcada. Y con portaobjetos de un grosor mayor a los de uso común. En la parte superior del porta objetos se encuentran cuatro canales longitudinales y uno trasversal central. En la parte superior e inferior del canal trasversal están grabadas dos rejillas, las cuales están a su vez subdivididas.
El volumen celular en el cual se han contado las células resulta de multiplicar la profundidad de la cámara por el factor de dilución, la superficie de los cuadrados y el número de cuadrados contados.1
Para determinar la viabilidad celular se emplean el método de tinción con azul tripán. El azul tripán es un colorante vital que se introduce en el interior de las células que presentan ruptura o daño en la membrana plasmática. Las células que aparecen en el microscopio, de color azul, son consideradas no viables.
Linfoma de células B .Grupo heterogéneo de tumores linfoides que generalmente expresan uno o más antígenos de células B o que representan la transformación maligna de linfocitos B del sistema inmunitario.2

MATERERIALES Y MÉTODOS

Equipo: Micropipeta de 100μL (Clinipett autoclavablel), micropipeta de 10μL, Cámara de Neubauer Bright light hemacytomether (Hausser scientific), Microscopio óptico (Leica).

Material: Puntas estériles para micropipeta (azul y amarilla), Tubos Eppendorf de 1.5 mL., Azul de Tripán (sigma T8154).

Procedimiento:

Preparación de la disolución 1:2. Se tomó 100µL del cultivo celular (linfoma de células B) y se colocó en un Eppendor. En otro Eppendor se agregó 10µL de azul tripán. Se homogenizó el cultivo con una micropipeta, y a partir del él se tomó 10µL, que fueron agregados al Eppendor en donde estaba contenido el azul tripán. Se prosiguió a homogenizar la mezcla azul tripán y cultivo nuevamente. Obteniendo así una dilución 1:2 del cultivo celular (factor dilución).

Montaje en la cámara de Neubauer. En la cámara de Neubauer se colocó el cubre objetos a lo largo. Con la punta de la micropipeta dispuesta en el canal, 10 μL de la suspensión de células y colorante se dejaron fluir por debajo del cubreobjetos en la cámara hasta que el área de la cuadrícula se llenó, evitando que se derramará o que entraran burbujas en el área de conteo. Figura 2.

Observación y conteo al microscopio. Una vez preparada la cámara Neubauer se colocó sobre la platina del microscopio óptico, dejándola unos minutos en reposo para que se sedimenten las células, sin dejar secar. Se observó y contó con el objetivo 10x en los cuadrantes 1, 2, 3, y 4. Una vez terminado el conteo se limpió la cámara de Neubauer.

OBSERVACIONES Y RESULTADOS

El conteo de las células observadas en los cuadrantes 1, 2, 3 y 4 de la cámara de Neubauer se registró en la Tabla 1. Se observó células teñidas de azul / no viables (19) y células brillantes/ viables (116), de un total de 135 células contadas. En la figura 3 se observan las células (brillantes /viables y teñidas de azul/ no viables) en el cuadrante tres de la cámara de Neubauer. Se realizaron cálculos para determinar % de viabilidad y concentración celular de la muestra proporcionada (linfoma de células B), cuyo valor obtenido fue 85.92% y 580 0000 cel /mL, respectivamente.

DISCUSIONES
Factores como la homogenización de y /o de la muestra o azul tripán, resuspensión de la muestra, exactitud y presión de los volúmenes tomados por las micropipetas, y la destreza de la persona para contar las células pueden afectan los resultados, por lo que son muy importantes estos aspectos, para obtener resultados confiables. Se consideró que los factores anteriores fueron controlados adecuadamente dentro de lo posible (calibración dudosa de las micropipetas) pero lo resultados están dentro de un rango aceptable.

CONCLUSIONES

Mediante la tinción con azul tripán, fue posible la diferenciación entre células viables/ brillantes y teñidas de azul / no viables, y así determinar el porcentaje de viabilidad celular. Con la cámara de Neubauer fue posible inferir la concentración celular. Se encontró a partir de las células (linfoma de células B) proporcionadas un 85.92 % de viabilidad y 580 0000 cel /mL de concentración celular.


BIBLIOGRAFÍA

1. Tecnicas y métodos de laboratorio clínico. Gaonzales de Buitrago J. 2004 Segunda edición. Ediciones Masson. Barcelona, España. parte III, pag.278-279

2. Anatomia patológica. Steves A, Lowe J. 2001 segunda edición al español. Ediciones Harcourt, Madrid España. Capitulo 15, enfermedades de los ganglios linfáticos, Pag 310-311.

Manejo de Microscopio

RESUMEN

El microscopio óptico representa una herramienta muy recurrida en distintos laboratorios, como biología celular, microbiología, etc. Por que permite ampliar el tamaño de objetos a gran medida. Las partes de microscopio se pueden describir como: parte mecánica, parte óptica y sistema de iluminación. La resolución de un microscopio óptico está determinada por la longitud de onda de la luz visible. Al ser el microscopio un instrumento óptico delicado se requiere que su operador tenga conocimiento sobre cada una de las partes y funciones de las mismas. Domine técnicas para uso adecuado, así como, conocimientos sobre cuidados de limpieza de todas sus partes y lentes incluyendo los respectivos agentes de limpieza. En la sangre periférica se distinguen diferentes formas celulares (glóbulos blancos, glóbulos rojos monocitos, eosinófilos, etc.) que se fueron observando con mayor resolución, al aumentar los objetivos, hasta llagar al objetivo de inversión que representa la mayor resolución del microscopio óptico El objetivo de la presente sesión de laboratorio correspondió al correcto uso del microscopio óptico compuesto, mediante el conocimiento de sus partes, adecuado funcionamiento y cuidado en uso respectivamente, así como desarrollar habilidad en su utilización al observar muestras (Frotis de sangre periférica).

INTRODUCCIÓN

El microcopio es el elemento determinante en estudio de la microbiología, al ampliar imágenes en gran medida, imágenes que de otra manera no lograríamos distinguir o ni si quiera observar.

Descripción de las partes del Microscopio

Parte Mecánica
Pie base o soporte basal: Es una pieza maciza y pesada para asegurar la estabilidad del aparato y servir de soporte a sus demás partes. Platina: Pieza metálica redonda o cuadrada donde se colocan las preparaciones; tiene en el centro una abertura circular por la que pasan los rayos luminosos procedentes del sistema de iluminación. La preparación se sujeta a las platinas fijas, con dos palanquitas móviles. Tubo: En el esta instalado el sistema óptico, constituido por dos tubos. Revolver: Pieza circular y giratoria en la que se insertan los objetivos. Brazo o soporte vertical: Parte por la cual debe asirse el microscopio para llevarlo de un lugar a otro. Carro o escuadra, pinzas: Parte mecánica accionadle mediante dos tornillos que permiten movimientos laterales o longitudinales para colocar la preparación en posición de observación. Tornillo Macrométrico: Tornillo de paso largo y por el cual se ejecutan desplazamientos grandes amplios y perceptibles a simple vista. Tornillo Micrométrico: En contraposición al anterior su paso es pequeñísimo y sus desplazamientos imperceptibles, debe usarse con sumo cuidado.1

Parte Óptica
Objetivos: Son los elementos más importantes del microscopio, se coloca cerca del material u objeto que se va a ver, formados por la reunión de varias lentes para corregir las aberraciones. Deben tratarse con mucho cuidado cualquier golpe puede variar la posición de las lentes y averiarlas. Se atornillan en el revolver. Son de dos clases, a) En seco, son los más empleados, entre la lente frontal y el porta objetivos solo hay aire, pertenecen los objetivos 10x y 40x, b) se llaman así porque debe interponerse entre la lente frontal y le preparación un líquido como por ejemplo aceite de inmersión. El aceite permite que entre más luz en el objetivo. Oculares: Los forman dos lentes separados por un diafragma y van montados en la extremidad superior del tubo, esta ubicados cerca del ojo del observador y produce un aumento secundario de la imagen creada por el objetivo. La lente superior se llama lente ocular; la inferior lente de campo.1

Sistema de Iluminación
Se encuentra situado bajo la platina y tiene la misión de iluminar los objetivos por medio de la luz transmitida, consta de: Diafragma: Va montado bajo la platina y permite graduar la fuente luminosa; el más usado es el tipo iris accionadle mediante manecilla lateral. Condensador: Sistema de lentes cuya función es condensar el haz de rayos luminosos, al enfocar la luz sobre el objeto permite una iluminación más uniforme del campo microscópico.1

El límite máximo de resolución de un microscopio óptico está determinado por la longitud de onda de la luz visible, que abarca desde1, 4μm (para el violeta) hasta 0,7μm (para el rojo lejano). La distancia límite a la que dos objetos pueden verse por separado -conocida como límite de resolución – depende tanto de la longitud de onda de la luz como de la apertura numérica de las lentes del sistema utilizado. Este último valor es una medida de la profundidad del ocular del microscopio, escalada en función a su distancia del objeto; expresándolo gráficamente, cuando más abre su ojo el microscopio es mayor su agudeza visual. El número de aumentos de un microscopio resulta de multiplicar los aumentos que proporciona cada una de las lentes presentes entre la fuente de iluminación y la lente ocular.2

Manejo adecuado del microscopio

Al ser el microscopio un instrumento óptico delicado, su manejo o trasporte debe de ser cuidadoso (tomarse de la base y brazo). Cuando se pretenda moverlo será necesario levantarlo y no arrastrarlo sobre la superficie, para no dañar su sistema óptico.
Normalmente el microscopio estará protegido del polvo con una funda, la cual se deberá cuidar.
El microscopio previo y después de su uso deberá encontrarse en las siguientes condiciones: partes y lentes limpios, objetivo de menor aumento en posición de observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda. Asegurarse de la limpieza las diferentes partes y lentes del microscopio o en su defecto limpiar, al encender la fuente de luz deberá encontrarse en su más baja intensidad. Una vez, de haberse cerciorado de las condiciones ideales de uso, conectar el microscopio a la fuente de electricidad y encender su luz. Ajustar la intensidad de luz y alinear los lentes. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas. Comenzar la observación con el objetivo de 4x 1
Para realizar el enfoque: Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparación con el macrométrico y, cuando se observe algo nítido la muestra, girar el micrométrico hasta obtener un enfoque fino.1
Pasar al siguiente objetivo. Bajar un poco la platina para evitar que tope con los objetivos. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparación y por ello es fácil que ocurran percances: incrustarlo en la preparación.1
Empleo del objetivo de inmersión: Bajar totalmente la platina. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habrá que echar una gota de aceite inmersión. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión en sentido contrario para evitar ensuciar los otros objetivos o la platina. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el porta objetos. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersión y la preparación es mínima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y limpiar los lentes del los objetivos y objetos sobre la platina. Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el revólver. En este momento ya se puede retirar la preparación de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en posición de observación. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para óptica. Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio.1

Otras recomendaciones: Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un papel de óptica. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo con pañuelos especiales para óptica. En cualquier caso se pasará el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden dañar las lentes y su sujeción. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico, platina, revólver y condensador). El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a través del ocular. 1


Aceite de inmersión

El aceite de inmersión se utiliza para el objetivo de 100x. Se usa generalmente aceite de cedro. Es un tipo especial de aguarrás, muy viscoso, que se obtiene del abeto Abies balsamea.

El índice de refracción del portaobjeto vidrio (1,5 aprox.), y del aceite de inversión son prácticamente iguales, los rayos de luz no son refractados al pasar de un medio a otro, lo que se traduce en una mayor resolución. El aceite de inmersión restringe el movimiento de la muestra, evita el rozamiento entre el cubre objeto y el objetivo de inmersión, y evita que la luz se desvíe propiciando que llegue concentrada hacia la muestra.1

Células de Frotis de sangre periférica

Procedimiento por el que se observa bajo un microscopio una muestra de sangre para contar los distintos tipos de células sanguíneas que circulan (glóbulos rojos, glóbulos blancos, plaquetas, etc.) y para determinar si el aspecto de las células es anormal.3

MATERIALES Y MÉTODOS

Se verifico las condiciones del microscopio óptico Leica pericromático (Nº 21) previo a su uso (fuente de luz a la menor intensidad, que la parte mecánica de la platina no sobresalga sobre el borde de la misma y que se encuentre abajo, limpieza de las partes y lentes (que fueron limpiadas), etc.). Las cuales resultaron adecuadas. Se conectó a la fuente eléctrica, encendió la fuente de luz y se régulo la intensidad de la misma. La muestra (frotis de sangre periférica) fue colocada sobre la platina sujetándola con las pinzas. Se ajustó el objetivo 10x acercando la lente objetivo a la preparación utilizando el tornillo macrométrico, mirando directamente y no a través del ocular, para no incrustar el objetivo en la preparación y así no dañar alguno de ellos o ambos. Mirando a través de los oculares, se ajustó lentamente el objetivo de la preparación con el macrométrico y, cuando se observó más clara la muestra, se giró el micrométrico hasta obtener una imagen fina. Figura 3.
Una vez terminada la observación en el objetivo 10x, se ajustó para el objetivo 40x. Bajando un poco la platina para evitar que tope con los objetivos. Sólo se ajustó un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Como el objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparación, cuidó de no incrustarlo en la, misma. Figura 4.
Para observar el frotis de sangre con el objetivo de inversión. Se bajó totalmente la platina, se colocó una pequeña gota de aceite de inmersión en el centro del de la muestra del portaobjeto, el revólver se giró en sentido contrario de manera que el aceite no ensuciará otros objetivos ni partes presentes o cerca de la platina. Mirando directamente al objetivo, se subió la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de aceite. Cuidando la distancia de la preparación y la lente, se enfoca y se observa la preparación. Figura 5.
Una vez finalizada la observación de la preparación se bajó la platina y se colocó el objetivo de menor aumento girando el revólver. Se retiró la preparación de la platina. Cuidando de no retirar el objetivo de inmersión en posición de observación. Se procedió a limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel y liquido especial para óptica. Se limpió el objetivo 40x y demás objetivos y lentes se encontraran perfectamente limpios. Se colocó el microscopio en la s siguientes condiciones: fuente de luz a la menor intensidad, que la parte mecánica de la platina no sobresalga sobre el borde de la misma y que se encuentre abajo, limpieza de las partes y lentes (que fueron limpiadas), etc. Cada integrante del equipo ajustó la distancia interpupilar a su medida. Alineación del condensador 17.5.

OBSERVACIONES Y RESULTADOS





















REFERENCIAS

1) Manual de prácticas de microbiología. Carlos Ganazo, Ignacio López-Guñi, Ramón Díaz. Tercera edición. Editorial Masson. España 2005.

2) Biología molecular de la célula. Albert Bruce. Tercera edición. Ediciones Omega, reimpresión enero, 2002.

3) Wheather’s Functional Histology A Text And Colour Atlas. H.G.Burkitt, B. Young, J.W. Heath. Churchill Livingstone. 3rd edition. 1993.

PANCREATINA

INTRODUCCIÓN

En las clases de enzimas que catalizan la hidrólisis de diversos èsteres hay diferencia entre las lipasas y las Esterasas. Esta diferencia se basa en su especificidad preferencial y grasas, o sea triglicéridos de ácidos grasos, de cadena larga, mientras que los substratos naturales de las esterasas, son los esteres sencillos de ácidos de bajo peso molecular. Sin embargo las dos clases de enzimas son sumamente inespecíficas en cuanto a su acción, y la naturaleza del acido graso o del alcohol tiene efecto no en la especificidad sino en la velocidad de reacción.

La hidrólisis de los triglicéridos que consumen los animales superiores se lleva a cabo principalmente en el intestino delgado, por medio de enzimas lipolìticas elaboradas en el páncreas. Las lipasas pancreáticas existen en dos tipos: las especificas para romper la unión ester en la posición alfa o alfa prima de los triglicéridos, y las especificas para las uniones beta. La hidrólisis completa de los triglicéridos procede entonces por pasos. Primero se hidrolizan rápidamente las uniones alfa y alfa prima, luego lentamente se rompe las uniones beta.

Estas reacciones se aceleran con las sales biliares como taurocolato o glicocolato de sodio, que emulsifican y solubilizan a los lípidos. Las sales biliares vienen en la bilis, secreción del hígado que pasa al intestino se provoca por la hormona colecistocinina, que se sintetiza en el intestino delgado y se libera a la circulación en respuesta en presencia de lípidos en el duodeno.

La lipasa (EC.3.1.1.3) (triacil glicerol acil hidrogenasa). También llamada antiguamente esteapsina, extraída de diferentes fuentes biológicas, contiene siempre diversas fracciones proteicas de muy diversos pesos moleculares, que van desde 39,000 hasta 200,000, todas ellas con actividad lipolìca. Estas esterasas hidrólisis substratos emulsificado, y no ataca a substratos en verdadera solución. Se cree que esto se debe a que la enzima se absorbe a su substrato emulsificado, y a la velocidad inicial de reacción está en función del número de moléculas de enzima adsorbidas en la interfase. Se le llama Pancreatina a un extracto de páncreas con fuerte actividad lipolitica. El método titrimètrico para determinar la acción de la lipasa, consiste en estimar por titulación la cantidad de ácidos grasos liberados de los èsteres.

OBJETIVO

Observar la actividad de la enzima lipasa indirectamente por titulación de los ácidos grasos liberados utilizando como base al hidróxido de potasio.

MATERIALES Y MÉTODOS

Acción de la lipasa Pancreática sobre la leche homogenizada. A cinco tubos numerados del uno al cinco se agregaron 10 mL de leche homogenizada, a cada uno. Tres mL de pancreatina al 5% se agregaron a cada uno de los cinco tubos de ensaye anteriores. Inmediatamente después, se agito y se agrego el contenido del tubo uno a un vaso de precipitado de 250 mL que contenía previamente 25 mL de alcohol etílico de 95 grados. También se agitaron los tubos dos, tres, cuatro y cinco. Para después llevarlos a un baño de agua a 37º C, registrando la hora exacta. Se agito el contenido del primer vaso de precipitado, se añadió 0.5mL de fenolftaleina y titulado con KOH 0.05 N hasta un obtener color rosa permanente. A los 10 minutos se sacó el tubo 2, y vació su contenido a otro vaso de precipitado con 25 ml de alcohol etílico, se añadió 0.5 ml de de fenolftaleina y se tituló con KOH de la misma manera que el caso anterior. A los 20 minutos saque el tubo numero 3, a los 30 minutos el tubo número 4 ya los 40 minutos el tubo 5. De el mismo tratamiento del tubo 1. Para los cálculos reste el valor obtenido con el tubo 1, que es el testigo, de los valores obtenidos en los siguientes tubos. Calcule los ml de KOH consumidos en cada tubo, y grafique ml de KOH vs tiempo.

Materiales:
1 Bureta de 25 mL
1 Soporte y pinza mariposa
5 Tubos de ensaye de 15x150 (gradilla)
1Pipeta de 10 mL
1 Pipeta de 5 mL
5 Vaso de precipitado de 250 mL
1 Agitador
1 Termómetro de 100°C
Reactivos:
50 mL de leche homogenizada
15 mL de pancreatina al 1%
125 mL de alcohol etílico de 90°
2.5 mL de fenolftaleína
45.5 mL de hidróxido de potasio(KOH)

OBSERVACIONES Y RESULTADOS
Como los substratos de la lipasa son los triglicéridos de cadena larga a los cuales hidroliza, rompen la unión Ester en la posición alfa y por lo tanto hay más triglicéridos después del rompimiento para lo cual se necesita más mL de KOH, para que los ácidos reaccionen con la base en presencia del alcohol y el producto es glicerol y sales de potasio de los ácidos grasos. Que es proporcional a los ácidos liberados.

CONCLUSIONES

Los triglicéridos son compuestos insoluble en agua, al álcalis que se usa en esa hidrólisis debe prepararse en alcohol se usa hidróxido de potasio disuelto en alcohol, siendo el resultado la hidrólisis de las ácidos grasos, en su forma sal de potasio y el glicerol libre. La lipasa Cataliza la hidrólisis de los ácidos grasos, rompiendo su larga cadena.
Se Observó la actividad de la enzima lipasa indirectamente por titulación de los ácidos grasos liberados.

CUESTIONARIO

¿Cuál es la acción de la lipasa pancreática? ¿Cuál es la diferencia entre lipasa y esterasa?
Cataliza la hidrólisis de los ácidos grasos. La diferencia se basa en su especificidad preferencial selectiva, es decir el substrato de la lipasa son triglicéridos de ácidos grasos de cadena larga, mientras que para las esterasas son los esteres sencillos de ácidos de bajo peso molecular.

¿Para qué sirven las sales biliares en la hidrólisis de las grasas?
La función de las sales biliares es la de emulsificar a los lípidos para que puedan ser de las enzimas lipasas y los productos puedan absorber por las membranas de las células intestinales, son como poderosos detergentes, solubles en agua. La solubilidad en agua la confiere el carácter polar de las sales.

¿Por qué en nuestro experimento para demostrar la acción de la lipasa podemos usar leche homogenizada, y como se debería hacer el experimento si se usara leche no homogenizada?
Los triglicéridos son insolubles en agua, por lo que es necesario trabajar con emulsiones, leche homogenizada por ejemplo, puesto que la velocidad de la hidrolisis dependerá del estado de dispersión de la enzima, para lograr una interface agua lípido. Si la leche no se encuentra homogenizada difícilmente se podrá, la grasa estará muy entera para, por lo que se tendrá que emulcificar.

¿Por qué en la demostración de la acción de la lipasa, el KOH consumido en la titilación, aumenta en cantidad a medida que trascurre el tiempo de reacción?
Como los substratos de la lipasa son los triglicéridos de cadena larga a los cuales hidroliza, rompen la unión Ester en la posición alfa y por lo tanto hay más triglicéridos después del rompimiento para lo cual se necesita más mL de KOH, para que los ácidos reaccionen con la base en presencia del alcohol y el producto es glicerol y sales de potasio de los ácidos grasos. Que es proporcional a los ácidos liberados.

¿Cuál es la acción de la hormona colecistocinina en el proceso normal de digestión de las grasas? Las hormonas que controlan la digestión son la gastrina, la secretina y la colecistocinina. La colecistocinina hace que el páncreas crezca y produzca las enzimas del jugo pancreático, y hace que la vesícula biliar se vacíe.
INVESTIGACIÓN

¿Qué son las lipoproteínas y cuáles son sus funciones en el organismo?

Las lipoproteínas son complejos macromoleculares esféricos formados por un núcleo que contiene lípidos apolares (colesterol esterificado y triglicéridos) y una capa externa polar formada por fosfolípidos, colesterol libre y proteínas (apolipoproteínas). Las lipoproteínas son agregados moleculares esféricos con una cubierta de unos 20 Ā de grosor formada por lípidos anfotéricos cargados, como colesterol no esterificado y fosfatidilcolinas; entre ellos se insertan las apolipoproteínas. Estas moléculas dirigen sus regiones apolares hidrófobas hacia el interior y sus grupos cargados hacia el exterior, donde interaccionan con el agua. Las lipoproteínas se dividen en varios grupos según su densidad: HDL: Lipoproteínas de alta densidad. Estas se conocen como las protectoras. Ya que no permiten que las otras lipoproteínas que son las agresoras se peguen a las células y nos provoque daños en nuestro cuerpo. IDL: Lipoproteínas intermedias.LDL: Lipoproteínas de baja densidad. Estas son las agresoras y son las que más daño nos pueden producir porque contienen mayor cantidad de colesterol, estas cantidades de colesterol y ésteres asociadas a la LDL son habitualmente de unas dos terceras partes del colesterol plasmático total.
Su función principal es el transporte de triglicéridos, colesterol y otros lípidos entre los tejidos a través de la sangre. Los quilomicrones y las lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) transportan por el cuerpo los triacilgliceroles provenientes de la comida y los endógenos (producidos por el organismo). Las lipoproteínas de baja densidad (LDL) y las de alta densidad (HDL) transportan el colesterol proveniente de la comida y el endógeno. Las HDL y las lipoproteínas de muy alta densidad (VHDL) transportan los fosfolípidos ingeridos y los endógenos. Las proteínas que se utilizan en el transporte de los lípidos son sintetizadas en el hígado y son denominadas «apolipoproteínas» o «apo». Hasta 8 apolipoproteínas pueden estar involucradas en la formación de la estructura de una lipoproteína. Las proteínas son llamadas Apo A-1, Apo A-2, Apo B-48, Apo C-3, etc.En su conjunto, las lipoproteínas conservan una concentración de lípidos en sangre de unos 500 mg de lípidos totales en 100 ml de sangre. De estos 500, 120 mg son triacilgliceroles (TAG), 220 mg es colesterol y 160 mg es fosfolípido. Las LDL contienen, típicamente, el 50-70 % del colesterol total sérico y ambos están directamente relacionados con los riesgos de enfermedades cardíacas o coronarias. Las HDL contienen, normalmente, el 20-30 % del colesterol total; los niveles de HDL están inversamente relacionados con los riesgos de enfermedades cardíacas o coronarias. Las VLDL contienen 10-15 % del colesterol sérico total y la mayor parte de los triglicéridos en el suero post-ayuno; las VLDL son precursoras de las LDL; se presume que algunas formas de VLDL, en especial las VLDL residuales, son aterogénicas. Pequeñas cantidades de colesterol son transportadas, también, por dos clases menores de lipoproteínas: las lipoproteínas de densidad intermedia («Intermediate Density Lipoproteins» o IDL), de densidad 1,006-1,019 Kg. /L y las lipoproteínas(a) de densidad 1,045-1,080 Kg. /L. Los quilomicrones (densidad <1,006 href="http://www.monografias.com/trabajos/epistemologia2/epistemologia2.shtml">el conocimiento de la homiostasis del colesterol que puede comprenderse revisando las consecuencias que tienen las concentraciones plasmáticas elevadas de colesterol cuando se mantiene de forma prolongada. El colesterol es muy insoluble y se acumula en los leucocitos que se depositan en las zonas de lesión sobre las paredes internas de las arterias. Si las concentraciones de colesterol son demasiado altas para su posterior eliminación hacia el torrente sanguíneo, estas células quedan repletas de depósitos grasos, que luego se endurecen formando una placa, y finalmente obstruyen vasos sanguíneos causando infartos, o sea, ataques cardiacos. VLDL: Lipoproteínas de muy baja densidad y son precursoras de las lipoproteínas se baja densidad.
Tanto el colesterol como los triglicéridos son transportados en sangre formando parte de moléculas llamadas lipoproteínas. Estas lipoproteínas están constituidas además por fosfolípidos, colesterol, proteínas y apolipoproteínas (Figura 1). De acuerdo a la participación porcentual de los diferentes componentes estructurales, se las clasifica en quilomicrones (QM), lipoproteínas de baja densidad (LDL), lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL), lipoproteínas de elevada densidad (HDL) y lipoproteínas de densidad intermedia (IDL).
BIBLIOGRAFÍA

Garcilaso Pérez, Jesús Rubén. Bioquímica metabólica, Hermosillo, Sonora, Editorial Unison. Imprenta Universitaria, 1983.
Garcilaso Pérez, Jesús Rubén, Eva Irma Véjar Rivera. Bioquímica descriptiva, 4a ed.-Hermosillo, Sonora Editorial UNISON, 2004
Eva Irma Véjar Rivera. Practicas de Bioquímica metabólica y enzimología, Hermosillo, Sonora, Editorial Universidad de Sonora, 1991

Índice de Refracción de la Sacarosa a Diferentes Concentraciones e Identificación de Sustancias a Través del Mismo

INTRODUCCIÓN

La refractrometría es una técnica analítica que consiste en la medida del índice de refracción de un líquido con el objeto de investigar su composición, si se trata de una dilución, de su pureza o si es un compuesto único. . El índice de refracción se mide en un refractómetro, en el se compara el ángulo de incidencia con el ángulo de refracción de la luz a una longitud de onda especifica.
La refracción de la luz es un fenómeno de desvió que experimenta el haz incidente al atravesar una solución ocasionada por la diferente naturaleza de aire y la solución sobre la que incide. La ley de Snell es una fórmula para calcular el ángulo de refracción de la luz al atravesar la superficie de separación entre dos medios de índice de refracción distinto, dice que el producto del índice de refracción por el seno del ángulo de incidencia es constante para cualquier rayo de luz incidiendo sobre la superficie de separación de dos medios.
Esta relación varía dependiendo de características como concentración de las sustancias disueltas, el tipo de solventes, entre otras. Se puede calcular la concentración de una solución mediante su índice de refracción. El índice de refracción (Ir) de una sustancia o medio transparente es la relación en la velocidad de la luz en el vacío y la velocidad de la luz en la sustancia o medio transparente.
Como objetivo se planteó emplear el índice de refracción como herramienta cualitativa al identificar sustancias y cuantitativa, determinar la concentración de sacarosa en una muestra problema. Ajuste de la curva de calibración por el método de mínimos cuadrados.

MATERIALES Y MÉTODOS

En la primera parte a fin de conocer el funcionamiento del refractómetro (Abbe Refractometer Leica Mark II Plus), se midió el índice de refracción del butanol, acetona y hexano. A fin de ser comparados con los datos bibliográficos (Tabla 1).
Se tomó tres sustancias desconocidas nombradas como A, D y E a las cuales se midió el índice de refracción por triplicado, para ser comparados con los datos bibliográficos. (Tabla 2).
A partir de una disolución al 50% de sacarosa (C12H22O11) y siguiendo el método de disolución seriada, se prepararon cinco diluciones con las siguientes concentraciones: 25%, 12.5%, 6.25%, 3.125% y 1.562%. Las cuales se aforaron con agua destilada a un volumen final de 10mL. Se midió el índice de refracción de las diferentes disoluciones, así como muestra patrón y muestra problema, cada medición se realizó por triplicado (Tabla 3).
Se elaboró una curva de calibración graficando concentración contra índice de refracción la cual se ajustó por el método de mínimos cuadrados (Tabla 4).
Manejo del refractómetro: Abrir el prisma secundario (se limpió con un algodón humedecido en etanol), y se colocó de 1 a 3 gotas de solución en el centro de la superficie del prisma. Se cerró cuidadosamente el prisma secundario. Se observó por el ocular y giró la perilla de compensación de color hasta que apareció una línea clara y definida en el campo de visión. Se giró la perilla de medición alineando la línea delimitadora con las líneas de intersección (ajusté claro y oscuro al centro).
Se leyó en la escala superior el índice de refracción y temperatura, se repitió la operación en función del número de soluciones a usar.

Defina conceptos generales que se involucran en el tema de refractómetro (por ejemplo: índice de refracción, ángulo de incidencia, ángulo de refracción, ángulo límite entre otros).
Índice de refracción: Relación que existe entre la velocidad de la propagación de la luz en el vacío y el desplazamiento en otro medio. Ángulo de incidencia: ángulo que forma un rayo de luz que llega a una superficie y la perpendicular a dicha superficie en el punto de llegada. Ángulo de refracción: ángulo entre la dirección de propagación de una onda reflejada por una superficie y la línea perpendicular a la superficie en el punto de reflexión. Ángulo límite: El ángulo límite es aquél ángulo incidente para el cual el rayo refractado emerge tangente a la superficie de separación entre los dos medios.
¿Qué es la refracción especifica y refracción molar? La refracción específica es una cantidad (R) que se define por la ecuación:
En donde n es el índice de refracción de la sustancia ρ es la densidad. La refracción molar es igual a la específica pero multiplicada por el peso molecular.

Mencione los factores que influyen en la medida del índice de refracción y explique por qué afectan
El índice de refracción depende, entre otras variables, de la longitud de onda del haz luminoso, de la temperatura (principalmente por el efecto que esta produce en la densidad del medio y concentración, de la composición y concentración del medio donde se produce la propagación del haz.

¿Por qué el índice de refracción de una sustancia se puede usar como instrumento de análisis cualitativo y cuantitativo de la misma?
Cada compuesto tiene un índice de refracción específico y este sirve para identificarlo y cuantitativo por que el índice de refracción señala las moléculas presentes en una disolución.

Razonar por qué las medidas de índice de refracción se deben acompañar de un superíndice que indica la temperatura de la medida y un superíndice que muestra la longitud de onda usada.
El índice de refracción puede variar dependiendo de la temperatura de la longitud de onda, para tener una certeza se debe indicar las anteriores variables.
Por ejemplo, nD 20 significaría que el índice de refracción se ha medido usando la linea D de emisión del sodio (589 nm) a una temperatura de 20 ºC.

Puesto que las diferencias entre los índices de refracción de compuestos similares son normalmente muy pequeñas. ¿Qué será necesario hacer? ¿Una gran precisión o exactitud de la medida? Explique.
Precisión se refiere a la dispersión del conjunto de valores obtenidos de mediciones repetidas de una magnitud. Cuanto menor es la dispersión mayor la precisión.
Exactitud se refiere a que tan cerca del valor real se encuentra el valor medido. En términos estadístico, la exactitud está relacionada con el sesgo de una estimación. Cuanto menor es el sesgo más exacto es una estimación.
Es mejor tener exactitud, porque lo que se quiere determinar es la concentración y porque no importa que tan cencas estén entre si

BIBLIOGRAFÍA

Handbook of chemistry and physics a ready reference book of chemical and physical data / edited by Robert C. Weast-- 53a ed. -- Cleveland, Ohio: Editorial the Chemical Rubber, 1972